【 – 话题作文】
第一篇:《银耳多糖的提取工艺》
银耳多糖的提取工艺
李帅涛
摘 要：国内常用的银耳多糖提取方法有热水提取法，酸碱提取法和酶解提取法等，其中酶解提取法具有提取时间短，条件温和等优点。本试验选取了酶解时间和提取时间作为研究对象，探讨了不同条件下银耳多糖的收率，由试验结果表明，解法提取银耳多糖的最适条件为：银耳与水的比例为1g:50ml,加入果胶酶浓度为1%，酶解时间45min,提取时间60min。
关键词：银耳多糖；酶解法；提取工艺
引 言：我国银耳资源丰富，为开发应用银耳多糖提供了有利条件。近年来，有关银耳多糖的研究越来越多，但这些研究多为银耳多糖的化学特性和药理作用方面的研究，少有关于银耳中提取银耳多糖的研究。目前银耳多糖的提取方法多为热水浸提法或酸碱法提取，但热水浸提法耗时过长，且收率较底，费时费力，因此不适合大规模的工业生产，而酸碱法提取虽然提取时间较短，却会破坏银耳多糖立的生物活性，使提取到的银耳多糖药用效果大大下降。本试验主要研究使用果胶酶酶解银耳，热水提取的技术来提取银耳多糖的方法。而如今生物工程工艺发展迅速，生物制品价格不断下降，这为用酶解法提取银耳多糖提供了可行性。用酶解法提取银耳多糖不仅能缩短单纯用热水法提取的时间，还不会像酸碱法那样破坏银耳多糖的生物活性。
材料与设备:
①实验材料：银耳;葡萄糖(分析纯):取1g葡萄糖加入1000ml容量瓶中，定容至1000ml;果胶酶：按100ml:1g加入果胶酶;苯酚（分析纯）;精确量取6ml苯酚放入100ml容量瓶中，定容至100ml;浓硫酸(发烟硫酸)
②实验设备：101型电热鼓风干燥；YP202N型电子天平；HH系列恒温水浴锅；电子万用炉;TDZ5-WS型台式低俗离心机；722E型可见分光光度计
分离与纯化：取市售银耳适量，洗净，70℃烘干后，破碎成粉末状，称取粉末0.5g（2%），果胶酶0.25g（1%），同时加入蒸馏水25mL，迅速置于45℃水浴锅中酶解，3个样品为一组，第一组酶解30min，第二组酶解45min，第三组酶解60min。酶解后迅速升温至98℃将酶灭活，然后每组样品分别于98℃水浴中保温浸提30min,45min,60min，浸提完成后置于冷水中冷却至室温，然后于4500rpm离心分离10min，最后取上清液待用。 含糖量测定：银耳浸提液离心后，分别取上清液1ml,加水19ml,即稀释20倍，取银耳浸提稀释液1mL于一洁净试管中，再加入苯酚试液1.0mL，浓硫酸5mL，混匀，室温放置30min，冷却后，于490nm处测定吸光度。
结果与分析：本试验采用果胶酶酶解银耳的方法提取银耳多糖。试验讨论了不同酶解时间与不同提取时间对提取效果的影响，最终确定最佳提取工艺为：在45℃下，用1%果胶酶酶解，水与银耳比例为100ml:1g,酶解时间为45min，然后于98℃热水浴中浸提60min。用此法提取银耳多糖，提取率可达40% ，远高于传统的银耳多糖提取工艺。相比传统工艺，果胶酶提取银耳多糖不仅有较高的提取率，还可以明显缩短提取的时间。银耳多糖的生物活性在长时间高温环境和酸碱性条件下容易受到破坏，酶解法提取环境温和，且提取时间较短，能较好的保留银耳多糖的生物活性。固定酶解时间时，提高提取时间可显著提高提取效果，改变酶解时间时，提取效果有提高，但不大，且从45min增加到60min增加不显著。
第二篇:《银耳多糖的制备及一般鉴定》
银耳多糖的制备及一般鉴定
【实验目的】
1．学习真菌多糖类的分离、纯化原理。 2．学习多糖类物质的一般鉴定方法。
3. 掌握真菌多糖类粗提取的具体步骤及相应原理。
【实验原理】
银耳是我国传统的一种珍贵药用真菌，具有滋补强壮、扶正固本之功效。银耳中含有的多糖类物质则具有明显提高机体免疫功能、抗炎症和抗放射等作用。
提取与纯化动植物中存在的多糖或微生物胞内多糖，因其细胞或组织外大多有脂质包围，要使多糖释放出来，第一步就是去除表面脂质, 常用醇或醚回流脱脂。第二步将脱脂后的残渣以水为主体的溶液提取多糖，这样提取得到的多糖提取液含有许多杂质。杂质主要是无机盐，低分子量的有机物质及高分子量的蛋白质、木质素等。第三步则要除去这些杂质，对于无机盐及低分子量的有机物质可用透析法、离子交换树脂或凝胶过滤法除去；对于大分子杂质可用酶消化 (如蛋白酶．木质素酶) ，乙醇或丙酮等溶剂沉淀法或金属络合物法。多糖提取液中除去蛋白质是一个很重要的步骤，常用方法有 S e v a g e法、三氯乙酸法、酶解法、三氟三氯乙烷法等。（1）S e v a g e法是除蛋白的经典方法，主要是利用蛋白质在氯仿中变性的特点，用氯仿:正丁醇=5:1或4:1的二元溶剂体系按1:5加入到多糖提取液中，混合物经剧烈振摇后离心，蛋白质与氯仿-正丁醇生成凝胶物而分离，分去水层和溶剂层交界处的变性蛋白质。（2）三氯乙酸法利用三氯乙酸，在低温下搅拌加入到多糖提取液中，直到溶液不再继续混浊为止离心弃沉淀，即可达到脱蛋白的目的。存在于溶液中的三氯乙酸经中和后，通过透析或超滤等方法除去。（3）酶解法提取是根据植物细胞壁的构成，利用酶反应所具有高度专一性的特点，选择相应的酶，将细胞壁的组成成分(纤维素、半纤维素和果胶质)水解或降解，破坏细胞壁结构，使细胞内的成分溶解、混悬或胶溶于溶剂中，从而达到提取目的，且有利于提高成分的提取率。（4）三氟三氯乙烷法将三氯乙烷按1:1的比例加到多糖提取液中，在低温下搅拌约10min，离心得上层水层，水层继续用上述方法处理几次即得，此法效率较高，但因其易挥发，不宜大量应用。
本实验采用固体法培养获得的银耳子实体，经沸水抽提、三氯甲烷一正丁醇法除蛋白质和乙醇沉淀分离可制得银耳多糖粗品。然后进行定性和定量测定及杂质含量测定。
【实验方法】
1．提取
1.1 银耳5g，剪碎，放入1000ml烧杯中。加500 ml蒸馏 水，加一匙NaHCO3 (可加速溶化)，沸水提取1.5h，同时搅拌。提取过程中可以少量加水。 1.2 三层纱布过滤，得提取液（约200ml）。将提取液移至分液漏斗中。 1.3 向提取液中加1/4体积的氯仿：正丁醇溶液（V:V=4:1）。振摇15min，离心（5 min）。离心后，溶液分为三层，吸取最上层清液，得到去蛋白的多糖液。{鲜银耳,根部,多糖}.
1.4 向去蛋白的多糖液加3倍体积的95%乙醇，玻棒搅拌既得多糖沉淀。 1.5 用乙醇和丙酮分别洗涤沉淀，干燥，得粗提取物。
2．含量测定（未做）{鲜银耳,根部,多糖}.
完成以上操作后，将各试管放入沸水中煮10min，然后冷至室温。在490nm下，测定吸光度，绘制标准曲线，根据标准曲线计算样品多糖的浓度。
另外以Folin酚法测定银耳多糖样品中蛋白质含量，以紫外分光光度法测定样品中核酸的含量。
【讨论】
实验中，我们首先用沸水提取银耳多糖，并在水中加入一匙碳酸氢钠。加入少量碱是因为对于银耳多糖这种含有糖醛酸的中性多糖，它们在碱液中有更高的提取率，但要控制碱的浓度，碱性较强时多糖可能会水解。在沸水煮银耳提取多糖的1.5小时内，要不停搅拌提取液，以防底部银耳碎片粘于烧杯底部变糊，同时可适量补充水分。得到银耳多糖的胶体溶液后，用三层纱布过滤可去除大分子溶质从而纯化多糖提取液（黄色透明液体，约200ml）。用S e v a g e法除蛋白，将氯仿：正丁醇溶液与提取液充分混匀，以使提取液中的蛋白质成分与氯仿：正丁醇溶液充分接触而生成凝胶物，不断振摇分液漏斗后，液体变为白色的乳状液，而不分层。离心混合液后，可能是因为离心时间不够充分（离心5min），溶液较为清晰的分成了3层，但在多糖层和蛋白层之间，还有变形的、未完全沉淀的蛋白质杂质。取离心后的上层清液加入95%乙醇后，搅拌即可得乳白色多糖沉淀。用乙醇和丙酮洗涤多糖沉淀可除去一些大分子杂质，但在洗涤时，由于对多糖沉淀搅拌较重，沉淀团块被打碎，有部分多糖损失。倒去洗涤液，我们得到了乳白色的多糖团块。
最后，感谢老师为我们提供了这次学习、实践的机会，感谢您们利用周末时间帮助我们完成实验。
第三篇:《银耳多糖的提取工艺》
银耳多糖的提取工艺
一、实验目的
1、了解银耳多糖制备的基本原理。
2、掌握糖类物质提取的基本操作技术。
二、实验原理
银耳是真菌的一种，是我国传统的珍贵药材之一，具有滋阴润肺、益胃生津等功效。常用于治疗虚劳咳嗽、阴伤燥咳、虚热口渴等症。
银耳多糖是银耳的主要药效成分，银耳中含有的多糖类物质则具有明显提高机体免疫功能，抗炎症和抗放射等作用。{鲜银耳,根部,多糖}.
1、制备（提取）原理：银耳多糖易溶于水，但不溶于乙醇。因此本实验采用沸水抽提、氯仿-正丁醇法除蛋白和乙醇沉淀分离制得银耳多糖粗品。然后再进行定性分析。
2、分析（鉴定）原理：
Molish反应
多糖在浓硫酸或浓盐酸的作用下，脱水形成糠醛及其衍生物，其与α-萘酚反应，作用生成紫色的化合物。原理是羰基与酚类进行了缩合，这样，糖与浓酸作用后，再与α-萘酚反应，就能生成紫色的化合物。因此，阴性反应证明没有糖类物质的存在；而阳性反应，则说明有糖存在的可能性，需要进一步通过其他糖的定性试验才能确定有无糖的存在。
斐林试剂
质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的氢氧化铜沉淀。氢氧化铜与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀，而葡萄糖本身则氧化成葡萄糖酸。用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化为：浅蓝色棕色砖红色（沉淀）。
三、实验试剂和器材
1、银耳子实体2、乙醇3、乙醚4、丙酮 5、Ssvag试剂： 氯仿：正丁醇=
6、Molish试剂：取5g α-萘酚用95%乙醇溶解至100mL，临用前配置，棕色瓶保存。7、斐林试剂：甲液质量浓度为0.1g/mL的氢氧化钠溶液；乙液质量浓度为0.05g/mL的硫酸铜溶液；临用时临时配置，将4～5滴乙液滴入2mL甲液中，配完后立即使用。
四、仪器和器材
烧杯 试管 分液漏斗 容量瓶 电炉 石棉网 纱布 离心机 真空干燥箱 电子天平{鲜银耳,根部,多糖}.
五、实验步骤
1、制备步骤
（1）取银耳子实体10g加水300mL，直火提取1h，提取过程中不断用玻棒搅拌。双层纱布过滤，提取液浓缩至100mL左右。
（2）浓缩液加入等体积的Sevag试剂去蛋白，3000rpm离心10min。
（3）上清液加入3倍95%乙醇，搅拌均匀后，3000rpm离心10min（或静止1h）。
（4）沉淀用无水乙醇洗涤2次，乙醚洗涤1次，真空干燥，得因而多糖粗品。{鲜银耳,根部,多糖}.
2、分析步骤
（1）称取银耳多糖粗品20mg，加水溶解并定容至100mL，作为样品制备溶液{鲜银耳,根部,多糖}.
供试。
（2）Molish反应
取试管，加入多糖溶液1mL，然后加入两滴Molish试剂，摇匀。倾斜试管，沿管壁小心加入约1mL浓硫酸，切勿摇动，小心竖直后仔细观察两层液面交界处的颜色变化。用水代替糖溶液，重复一遍，观察结果。
（3）斐林试剂
取试管，将4～5滴乙液滴入2mL甲液中。摇匀后，分别加入4滴待测糖溶液，置于沸水浴中加热2～3min，取出冷却，观察沉淀和颜色变化。
制药1201班
戴开武